Ηλεκτροφόρηση: τι είναι, τι είναι και πώς γίνεται

Περιεχόμενο

• Σε τι χρησιμεύει
• Πώς γίνεται
• Τύποι ηλεκτροφόρησης
• 1. Ηλεκτροφόρηση αιμοσφαιρίνης
• 2. Ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών

Η ηλεκτροφόρηση είναι μια εργαστηριακή τεχνική που πραγματοποιείται με σκοπό τον διαχωρισμό των μορίων ανάλογα με το μέγεθός τους και το ηλεκτρικό φορτίο, έτσι ώστε να μπορεί να γίνει η διάγνωση ασθενειών, να επαληθευτεί η έκφραση πρωτεΐνης ή να εντοπιστούν μικροοργανισμοί.

Η ηλεκτροφόρηση είναι μια απλή και χαμηλού κόστους διαδικασία, που χρησιμοποιείται στην εργαστηριακή ρουτίνα και σε ερευνητικά έργα. Σύμφωνα με τον σκοπό της ηλεκτροφόρησης, μπορεί να είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθούν άλλες εξετάσεις και εξετάσεις για να επιτευχθεί διάγνωση, για παράδειγμα.

Σε τι χρησιμεύει

Η ηλεκτροφόρηση μπορεί να πραγματοποιηθεί για διαφορετικούς σκοπούς, τόσο σε ερευνητικά έργα όσο και σε διάγνωση, καθώς είναι μια απλή και χαμηλού κόστους τεχνική.Έτσι, η ηλεκτροφόρηση μπορεί να πραγματοποιηθεί για:

• Προσδιορίστε ιούς, μύκητες, βακτήρια και παράσιτα, με αυτήν την εφαρμογή να είναι πιο συχνή σε ερευνητικά έργα.
• Δοκιμή πατρότητας;
• Ελέγξτε την έκφραση των πρωτεϊνών.
• Προσδιορίστε μεταλλάξεις, για παράδειγμα χρήσιμες στη διάγνωση της λευχαιμίας.
• Αναλύστε τους τύπους κυκλοφορούντος αιμοσφαιρίνης, που είναι χρήσιμοι στη διάγνωση της δρεπανοκυτταρικής αναιμίας.
• Αξιολογήστε την ποσότητα των πρωτεϊνών που υπάρχουν στο αίμα.

Σύμφωνα με τον σκοπό της ηλεκτροφόρησης, μπορεί να είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθούν άλλες συμπληρωματικές εξετάσεις για να ολοκληρώσει η διάγνωση ο γιατρός.

Πώς γίνεται

Για να εκτελεστεί ηλεκτροφόρηση, απαιτείται το πήκτωμα, το οποίο μπορεί να είναι πολυακρυλαμίδιο ή αγαρόζη ανάλογα με το σκοπό, ρυθμιστικό ηλεκτροφόρησης και δεξαμενή, δείκτης μοριακού βάρους και φθορίζουσα βαφή, εκτός από εξοπλισμό φωτός UV ή LED, επίσης γνωστός ως φωτιστικός φωτισμός.

Μετά την προετοιμασία της γέλης, πρέπει να τοποθετηθεί ένα συγκεκριμένο αντικείμενο έτσι ώστε τα φρεάτια να φτιάχνονται στο πήκτωμα, το οποίο ονομάζεται ευρέως χτένα, και να αφήνεται το πήκτωμα να πήξει. Όταν το τζελ είναι έτοιμο, απλώς απλώστε τις ουσίες στα φρεάτια. Για αυτό, ένας δείκτης μοριακού βάρους πρέπει να τοποθετηθεί σε ένα από τα φρεάτια, ένας θετικός μάρτυρας, ο οποίος είναι η ουσία που είναι γνωστή τι είναι, ένας αρνητικός μάρτυρας, ο οποίος εγγυάται την εγκυρότητα της αντίδρασης και τα δείγματα προς ανάλυση. Όλα τα δείγματα πρέπει να αναμιγνύονται με μια φθορίζουσα βαφή, καθώς με αυτόν τον τρόπο είναι δυνατόν να απεικονιστούν οι ζώνες στον transilluminator.

Το πήκτωμα με τα δείγματα πρέπει να τοποθετηθεί στον κάδο ηλεκτροφόρησης, ο οποίος περιέχει το ειδικό ρυθμιστικό διάλυμα, και στη συνέχεια η συσκευή ενεργοποιείται έτσι ώστε να υπάρχει ηλεκτρικό ρεύμα και, κατά συνέπεια, πιθανή διαφορά, η οποία είναι σημαντική για τα σωματίδια διαχωρισμού σύμφωνα με τους φορτίο και μέγεθος. Ο ηλεκτροφορητικός χρόνος λειτουργίας ποικίλλει ανάλογα με τον στόχο της διαδικασίας και μπορεί να διαρκέσει έως και 1 ώρα.

Μετά τον καθορισμένο χρόνο, είναι δυνατή η προβολή του αποτελέσματος της ηλεκτροφορητικής διαδρομής μέσω του transilluminator. Όταν το πήκτωμα τοποθετείται κάτω από το φως UV ή LED, είναι δυνατό να απεικονιστεί το μοτίβο ζώνης: όσο μεγαλύτερο είναι το μόριο, τόσο μικρότερη είναι η μετανάστευσή του, πλησιάζει το φρεάτιο, ενώ όσο πιο ελαφρύ είναι το μόριο, τόσο μεγαλύτερο είναι το μεταναστευτικό δυναμικό.

Για να επικυρωθεί η αντίδραση, οι ζώνες του θετικού μάρτυρα πρέπει να οπτικοποιηθούν και τίποτα δεν πρέπει να απεικονιστεί στον αρνητικό μάρτυρα, γιατί διαφορετικά αποτελεί ένδειξη ότι υπήρχε μόλυνση και ότι ολόκληρη η διαδικασία πρέπει να επαναληφθεί.

Τύποι ηλεκτροφόρησης

Η ηλεκτροφόρηση μπορεί να εκτελεστεί για διαφορετικούς σκοπούς και, ανάλογα με το σκοπό της, μπορούν να χρησιμοποιηθούν διάφοροι τύποι πηκτής, με τους πιο συνηθισμένους να είναι πολυακρυλαμίδιο και αγαρόζη.

Η ηλεκτροφόρηση για τον εντοπισμό μικροοργανισμών είναι πιο συνηθισμένη να πραγματοποιείται σε ερευνητικά εργαστήρια, ωστόσο, για διαγνωστικούς σκοπούς, η ηλεκτροφόρηση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό αιματολογικών ασθενειών και ασθενειών που εξελίσσονται με την αύξηση της ποσότητας πρωτεϊνών, που είναι οι κύριοι τύποι ηλεκτροφόρησης:

1. Ηλεκτροφόρηση αιμοσφαιρίνης

Η ηλεκτροφόρηση αιμοσφαιρίνης είναι μια εργαστηριακή τεχνική που εκτελείται για τον εντοπισμό των διαφόρων τύπων αιμοσφαιρίνης που κυκλοφορούν στο αίμα, καθιστώντας δυνατή την αναγνώριση της παρουσίας ασθενειών που σχετίζονται με τη σύνθεση της αιμοσφαιρίνης. Ο τύπος της αιμοσφαιρίνης προσδιορίζεται μέσω ηλεκτροφόρησης σε ένα συγκεκριμένο pH, ιδανικά μεταξύ 8,0 και 9,0, με ένα σχέδιο ζωνών που μπορούν να συγκριθούν με το κανονικό πρότυπο, επιτρέποντας τον εντοπισμό των μη φυσιολογικών αιμοσφαιρινών.

Για ποιο λόγο είναι: Η ηλεκτροφόρηση της αιμοσφαιρίνης πραγματοποιείται για τη διερεύνηση και τη διάγνωση ασθενειών που σχετίζονται με τη σύνθεση της αιμοσφαιρίνης, όπως η δρεπανοκυτταρική αναιμία και η νόσος της αιμοσφαιρίνης C, εκτός από το ότι είναι χρήσιμη στη διαφοροποίηση της θαλασσαιμίας. Μάθετε πώς να ερμηνεύετε την ηλεκτροφόρηση της αιμοσφαιρίνης.

2. Ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών

Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι μια εξέταση που ζητά ο γιατρός για να αξιολογήσει την ποσότητα των πρωτεϊνών που κυκλοφορούν στο αίμα και, επομένως, για τον εντοπισμό ασθενειών. Αυτή η εξέταση γίνεται από ένα δείγμα αίματος, το οποίο φυγοκεντρείται για να ληφθεί το πλάσμα, το μέρος του αίματος που αποτελείται, μεταξύ άλλων ουσιών, από πρωτεΐνες.

Μετά την ηλεκτροφόρηση, μπορεί να απεικονιστεί ένα σχήμα ζωνών και, στη συνέχεια, ένα γράφημα στο οποίο υποδεικνύεται η ποσότητα κάθε κλάσματος πρωτεϊνών, που είναι θεμελιώδης για τη διάγνωση.

Για ποιο λόγο είναι: Η ηλεκτροφόρηση των πρωτεϊνών επιτρέπει στον γιατρό να διερευνήσει την εμφάνιση πολλαπλού μυελώματος, αφυδάτωσης, κίρρωσης, φλεγμονής, ηπατικής νόσου, παγκρεατίτιδας, λύκου και υπέρτασης σύμφωνα με το σχήμα της ζώνης και το γράφημα που παρουσιάζεται στην έκθεση εξέτασης.

Κατανοήστε πώς γίνεται και πώς να κατανοήσετε το αποτέλεσμα της ηλεκτροφόρησης των πρωτεϊνών.